Zacházení s termocyclerem Mastercycler ep gradient S

přístroj se zapíná v zadní části vpravo od přívodního kabelu

přístroj ovládáme pomocí klávesnice v pravé a dolní části kontrolního panelu nebo pomocí myši

po zapnutí je třeba se přilogovat, případně zadat PIN

základní obrazovka ukazuje několik ikon

• ikona Eppendorf (základní menu) nabízí např. vypnutí přístroje („Shutdown“) – přístroj VŽDY vypínáme tímto příkazem

• následují ikony uživatelů, po jejich rozbalení je možno vidět jednotlivé složky a PCR programy v nich uložené

vytvoření nového programu

• najedeme na příslušnou složku a stiskneme tlačítko „New“

• napíšeme jméno programu (8 znaků), stisknutím „Keybd“ je možno zobrazit klávesnici

• stiskneme OK a program se objeví v příslušné složce

• stiskneme „Edit“ a můžeme v našem programu měnit teploty a délky jednotlivých kroků a počet cyklů

• po stisknutí „Header“ je možno zadat předehřívání a teplotu víka před vlastní reakcí (ESP heated lid), zvolit typ Mastercycler ep gradient S a zadat typ kontroly (block nebo simulated tube)

• gradient, time a/nebo temperature increment a ramping time v libovolném kroku nastavíme po stisknutí tlačítka „Option“

• teploty na gradientu v jednotlivých sloupcích bloku se zobrazí stiskem „ShowGrad“, maximální rozpětí gradientu je 24 °C

• program je třeba uložit stiskem „Save“ (tato možnost se zobrazí po stisku „>>“ v pravé dolní části)

spuštění vybraného programu

• vložíme PCR zkumavky, stripy nebo destičku

• přitáhneme víko směrem k sobě na doraz

• najedeme na příslušný program, případně ho ještě překontrolujeme po stisku „Edit“

• stiskneme start, pokud byla v programu zadána metoda kontroly „sim. tube“, je třeba zadat počet vložených zkumavek a objem PCR reakce (v ml)

• po stisku „OK“ se začne zahřívat víko, displej zobrazuje dobu do konce reakce, čas startu i konce, teplotu bloku i víka a status

• ve chvíli, kdy víko dosáhne zadané teploty (standardně 105 °C), je automaticky přitlačeno na zkumavky, začíná vlastní reakce a na displeji je graficky znázorňován průběh reakce

• po ukončení programu je třeba stisknout „Enter“, víko je odjištěno a můžeme vyndat případné produkty PCR reakce

• v průběhu PCR reakce je možné vytvářet či editovat další programy, na údaje o průběhu reakce se dostaneme po najetí na ikonu „Cycler1“ (je zelená, pokud právě probíhá reakce) v hlavním menu a stiskem „Status“