Měření koncentrace DNA pomocí Biophotometeru
- přístroj se zapíná na zadní straně nad přívodním kabelem
- stiskneme tlačítko „7 (dsDNA)“ – měření koncentrace double stranded (dvoušroubovicové) DNA
- zkontrolujeme nastavení parametrů stisknutím tlačítka „Parameter“ (v menu se pohybujeme tlačítky se šipkami, menu opustíme najetím na PARAMETER EXIT a stisknutím „Enter“
- FACTOR 50
- CORR.WITH E320 ON
- UNIT ng/μl
- MOL.UNIT pmol/μl
- CUVETTE 10 mm
- je třeba změřit blank, tj. roztok bez DNA
- do čisté kyvety (eppendorf UVette) napipetujeme 50 μl TE bufferu nebo vody
- vyjmeme černou záslepku z otvoru pro vkládání kyvet a kyvetu vložíme nadoraz do otvoru plnou stěnou směrem k sobě a od sebe (tj. tak aby optická dráha ve spodní části kyvety byla oněch 10 mm)
- stiskneme tlačítko „Blank“, přístroj zavrčí a ukáže absorbanci 0
- DNA neměříme přímo, ale zředěnou (koncentrace by mohla být mimo měřitelnost přístroje a hlavně – nemusíme svojí DNA plýtvat), např. 1:9, tj. pokud stiskneme tlačítko „Dilution“, můžeme nastavit ředění, např. 5 („Enter“) + 45 („Enter“)
- měření vzorku – do kyvety napipetujeme 45μml vody a 5 μl DNA, promícháme intenzivním pipetováním, stiskneme tlačítko „Sample“ a přístroj ukáže koncentraci našeho originálního vzorku DNA (nikoliv koncentraci v kyvetě!)
- poznamenáme si absolutní hodnoty absorbancí A260, A280, poměr těchto hodnot a koncentraci DNA v ng/μl
- po skončení měření vyjmeme kyvetu, vrátíme zpět záslepku a přístoj vypneme
Akce dokumentů