Metodika

Kmeny zygomycetů

V Atlase zygomycetů jsou použity kmeny uchovávané ve Sbírce kultur hub (CCF) katedry botaniky PřF UK v Praze. Většina jich byla izolována z území České republiky, a to pracovníky a studenty katedry botaniky PřF UK v Praze i externími spolupracovníky. Výjimečně pocházejí některé kmeny ze zahraničí. Údaje o původu použitých kmenů jsou uvedeny u charakteristiky jednotlivých druhů.

Uchovávání kultur zygomycetů

Zygomycety lze většinou snadno kultivovat na agarových živných médiích. V CCF jsou uchovávány ve zkumavkách v chladničce při 5-8 °C na sladinovém agaru (SL) a bramboromrkvovém agaru (PCA). Přeočkovávání je doporučováno po 6 měsících. Některé zygomycety jsou uchovávány v lyofilizované formě v odtučněném sušeném mléce.

Kultivační média vhodná pro identifikaci zygomycetů

Doporučována jsou např. následující média: sladinový agar (SL) nebo agar s maltextraktem (MEA), bramborodextrózový agar (PDA), Sabouraudův agar (SAB) a podobná média s obsahem peptonu, kvasničného extraktu nebo maltextraktu (MEYE, MSMA, YpSs, YEA). Pro identifikaci zástupců rodu Mortierella je doporučován agar s půdním výluhem (SEA). Složení vybraných agarových médií viz níže.

Kultivační podmínky: většinou ve tmě při 25 °C po dobu 3-7 dní (případně déle). Některé houby je vhodné kultivovat i při 15 °C, 37 °C, 45 °C nebo 50 °C. Zygospory se tvoří obvykle při 20 °C.

Podrobnější údaje jsou uvedeny ve specializované odborné literatuře.

Pozorovací média

Pro pozorování mikroskopických znaků významných pro identifikaci zygomycetů se doporučuje voda nebo 4%-ní vodný roztok genciánové violeti. Při přípravě mikroskopických preparátů pro webový atlas zygomycetů bylo jako pozorovací médium nejčastěji použito Melzerovo činidlo, které má vysoké projasňovací vlastnosti a osvědčilo se pro fotografování. Méně často byla použita kyselina mléčná obarvená bavlnovou modří nebo voda.

Fotodokumentace

Mikrofotografie byly pořízeny na světelném mikroskopu Olympus BX51 s Nomarského kontrastem (DIC - differential interference contrast), vybaveném digitálním fotoaparátem Olympus E-510 a programem QuickPHOTO MICRO 2.3.

Snímky kolonií hub byly pořízeny většinou na skeneru (HP OfficeJet G55), některé též digitálním fotoaparátem (Sony DSC F717).

Makrofotografie kolonií byly zhotoveny pod binokulární lupou (Olympus SZX 12) s digitálním fotoaparátem (Olympus C-7070 WZ).

Skenové fotografie byly zhotoveny v Laboratoři elektronové mikroskopie (LEM (link is external)), PřF UK v Praze pod vedením Mgr. Miroslava Hyliše, Ph.D. Vzorky kultur hub byly fixovány roztokem 2,5 % glutaraldehydu v 0,1 M fosfátovém pufru, odvodněny vzestupnou ethanolovou řadou, sušeny metodou kritického bodu CO₂ v přístroji Bal-Tec CPD 030, a pokoveny 3 nm zlata iontovým naprašováním v přístroji Bal-Tec SCD 050. Snímky byly pořízeny na skenovacím elektronovém mikroskopu SEM JEOL 6380 LV. Podrobnosti viz na webu LEM (link is external).

Úprava fotografií. Všechny fotografie byly upravovány v programu ACDSee Verze 4.0 (2001) nebo Zoner Photo Studio 10 (2009).

Webové stránky

Nové webové stránky Katedry botaniky PřF UK v Praze běží od roku 2009 v redakčním systému Drupal pod správou Mgr. Vojtěcha Zeiska. Systém Drupal byl použit i pro tvorbu webového atlasu zygomycetů a s ním spojené fotogalerie zygomycetů uspořádané podle rodů.

Složení a příprava vybraných agarových médií a činidel

Všechna agarová média se sterilizují v autoklávu při 121 °C po dobu 15 minut (při tlaku 1,2.105 Pa).

CZ – Czapkův agar (Czapek Agar)

CZ koncentrát:

Cu-Zn koncentrát:

GKCH – Glukózový agar s kvasničným extraktem a chloramfenikolem

pH 6,6

MEA – Agar se sladovým extraktem (Malt Extract Agar)

pH 5,6

MEYE – Agar s maltextraktem a kvasničným extraktem (Malt Extract Yeast Extract)

MSMA – Modifikovaný Synthetic Mucor Agar

PCA – Bramboro-mrkvový agar (Potato Carrot Agar)

Brambory a mrkev nastrouhat, vařit 15 minut. Přefiltrovat přes gázu, doplnit do 1 litru. Přidat agar.

PDA – Bramboro-dextrózový agar (Potato Dextrose Agar)

Oloupané brambory nakrájet na kostky a přilít 1 l vody, změřit objem směsi, vařit 1 hodinu. Rozmixovat, změřit objem směsi a doplnit vyvařenou vodu na předem změřenou hodnotu. Přidat agar a dextrózu.

SAB – Sabouraudův agar (Sabouraud agar)

SEA – Agar s půdním výluhem (Soil Extract Agar)

500 g zeminy vařit 1 hodinu v 1200 ml vody, přefiltrovat přes filtrační papír a doplnit na 1000 ml. Upravit pH na 6-6,5. Přidat 15 g agaru na 1 litr výluhu.

SL – Sladinový agar (Wort Beer Agar)

Pivovarskou sladinu naředit vodou na požadovanou hodnotu stupňů cukernatosti podle Balinga (4° nebo 8°).

Do 1000 ml takto získaného roztoku přidat 20 g agaru, rozvařit, přelít do 500 ml erlenek (po 400 ml).

YpSs – Agar s kvasničným extraktem a škrobem (Yeast extract Soluble starch)

YEA – Agar s kvasničným extraktem (Yeast extract agar)

Pozorovací média

ME – Melzerův roztok (Melzer´s reagent)

LA – Kyselina mléčná (Lactic Acid)

Používá se kyselina mléčná (cca 85%) obarvená bavlnovou modří.